1.- botón
encendido y calibración al aire (0% T). Nos
permite primeramente encender y apagar el aparato, posteriormente, calibrar el
aparato al valor de 0%de T.
2.-con la celda partimiento de la muestra. Nos permite colocar la celda (recipiente)
que contenga la muestra
3.-
foco del piloto, nos indica que el aparato esta encendido y podemos leer las
escalas de absorbancia y transmitancia: la primera logarítmica, de 0 a 2.0,en
ella podemos leer el valor de absorbancia que registre el aparato y, en la
segunda escala decimal de 0 a 100%, el vlor de transmitancia que registre el
aparato.
4.- botón
selector de la longitud de onda. Nos permite seleccionar la longitud de onda de
trabajo en nm y la izquierda la escala de longitud de onda en nm
5.- botón
de calibración con el blanco o testigo.Nos permite calibrar el aparato al valor de cero A o 100% de T.
utilizando el blanco o testigo.
1.
compartimiento de la muestra (simple comperment).
Nos
permite colocar la celda (recipiente) que contenga la muestra.
2.-
pantalla digital. Lectro óptico (digital readout). En ella podemos leer el valor
de la absorbancia, transmitancia, concentración o el factor que registre el
aparato.
3.-
Tecla MODE o selectora de funciones (Duv mode selector). T (ttransmitancia9, A
(absorbancia), C (concentración) y F factor). Nos permite seleccionar la
función deseada T, A, C, o F.
4.-
Tecla DEC (concentración adjustment controls). De ajuste de concentración para
incrementar los valores. Cuando de seleccione la función de concentración para
ajustar el valor de concentración de la solución estándar (St). Con esta tecla
se puede ir aumentando el valor que se observa en la escala digital.
5.- tecla
INC (concentración adjustment controls).De ajuste de concentración para disminuir los valores. Cuando se
seleccione la función de concentración para ajustar el valor de la solución estándar (St), con esta tecla se puede ir disminuyendo el valor que
se observa en la escala digital.
6.Tecla para imprimir (Print Button). Cuando el aparato está conectado a
una computadora o con un registrador de datos, con esta tecla se puede mandar
a imprimir los valores obtenidos de las lecturas.
7.interruptor (Lctmp Power Switch). Se utiliza para encender las lámparas de
Tungsteno (VIS) y deuterio (UV). Sirve para encender la fuente luminosa que se
requiere trabajar.
8.Botón de encendido de la lámpara de
deuterio (Deu-terium LampStarter Button). Cuando se requiere utilizar la fuente
luminosa de deuterio, después de colocar el interruptor en la posición
correspondiente, es necesario oprimir este botón durante unos tres segundos
para que la fuente se encienda, si no se oprime este botón aunque el
interruptor indique deuterio, la fuente luminosa no se encenderá.
9.Botón de espejos (Mirror Lever) (VIS-UV). Nos permite seleccionar
la posición de VIS cuándo se requiere utilizar el aparato en la región
visible, y UV, para la región ultravioleta, orientando una serie de espejos que
se encuentran en la parte interna del aparato y así reflejar de la fuente
luminosa adecuada la energía necesaria y, después de atravesar la muestra problema,
reflejar la radiación transmitida hacia el íotodetector correspondiente de
acuerdo a la radiación utilizada.
10.Botón de encendido y apagado del aparato
(Power Switch) (ON-OFF). Nos permite encender o apagar el aparato.
11,Botón selector de longitud de onda (Wavelength Selection). Nos
permite seleccionar la longitud de onda de trabajo en nm y al lado izquierdo
inmediatamente la escala de longitud de onda, en ella se lee la longitud de
onda en nm, que se va seleccionando mientras se gira el botón selector de
longitud de onda.
Botón selector de sensibilidad (Lo-M-Hi)
(Sensitivity Switch). Según las necesidades de trabajo nos permite
seleccionar una sensibilidad baja. (Lo), media (M) o alta (Hi).
13.Botón de ajuste a O de A y 100% de T (100% T Zero A Control), Nos
permite calibrar el aparato al valor de O de A o 100% de T, utilizando el
blanco o testigo.
Los espectrofotómetros que
trabajan con radiación visible tienen una trayectoria interna que se muestra
en forma sintetizada como se observa en la ilustración.
Los espectrofotómetros que
trabajan con la radiación. Visible y ultravioleta presentan doble fuente ole
radiación (lámparas) y dos foto detectores (fototubos), y están equipados con
espejos móviles para poder reflejar la radiación en la dirección, necesaria.
En la figura i'08 se muestra cómo es la trayectoria interna en un
espectrofo-tótnetro de radiación visible ultravioleta.
3.Saque la celda con el blanco o testigo con que se calibró al valor de
cero de A del compartimiento de la muestra y del portaceldas,
4.Intercambie en el portaceldas y en el compartimiento de la muestra las
diferentes soluciones estándar y problemas, para ir registrando
las lecturas de cada una de estas soluciones.
5.Elabore una tabla de valores que contenga la concentración y lectura
de cada una de las soluciones de la serie, la longitud de onda seleccionada y
el nombre del compuesto, radical, o ion a determinar.
6.Dibuje en una hoja de papel milimétrico la curva de calibración.
7.Determine la lectura de la solución problema, si este valor no está
comprendido entre los límites de la curva de calibración, se hará una dilución.
8.Interpole la lectura de la solución problema en la curva de calibración y
determine la concentración de esta solución problema.
9.O bien,
podrá utilizar el método directo o el método
del factor que más adelante se describirán.
Obtención de lecturas en el SP 21D utilizando la Junción T
1.Calibre el SP 21 D siguiendo los pasos indicados en la técnica de
calibración.
2.Presione la tecla MODE para colocar el cursor colocar la posición de
transmitancia T.
3.Saque la celda con el blanco o testigo con que se calibró al valor de
cien de T del compartimiento de la muestra y del portaceldas.
4.Intercambie en el portaceldas y en el compartimiento de la muestra las
diferentes soluciones estándar y problemas para ir registrando
las lecturas de cada una de estas soluciones.
5.Elabore
una tabla de valores que contenga la concentración y lectura de cada una de las soluciones de la serie, la longitud de onda
seleccionada y el nombre del compuesto, radical, o ion a determinar.
6.Dibuje en una hoja de papel semilogarítmico la curva de calibración.
7.Determine la lectura de la solución problema, si este valor no está
comprendido entre los límites de la curva de calibración, se hará una
dilución.
8.Interpole
la lectura de la solución problema en la curva de calibración y
determine la concentración de esta solución problema.
Obtención de
resultados de concentración en el SP 2 ID utilizando la Junción C
1.Calibre el SP 21D, siguiendo los pasos indicados en la técnica de
calibración utilizando A o T.
2.Presione la tecla MODE para colocar el cursor en la posición de concentración
C.
3.Saque la celda con el blanco o testigo del compartimiento de la muestra
y del porta celdas con que se calibró al valor de cero de A o 100% de T e
introduzca en el portaceldas y en el compartimiento de la muestra por la
solución estándar.
4.Presione las teclas DEC o INC hasta que en la escala digital aparezca el
valor representativo de la concentración de la solución estándar.
5.Intercambie en el porta celdas y en el compartimiento de la muestra las
diferentes soluciones problema para ir registrando las lecturas de concentración en forma directa de la escala digital con sus unidades
correspondientes (las unidades serán las mismas que se están manejando para el
estándar).
Aplicaciones de la SP VIS-UV
La espectrofotometría VIS-UV
tiene una gran aplicación en las determinaciones cuantitativas en muchas áreas,
las cuales, en su mayoría, en la actualidad están autorizadas por NOM (Norma Oficial
Mexicana) y se publican
Ejemplos de
las aplicaciones y determinaciones espectrofotométricas
•Determinaciones en los análisis clínicos
en sangre
Normas para el análisis de
aguas potables y residuales
NOM
APLICACIÓN
NMX-AA39
Determinación de
sustancias activas al azul de metileno en aguasresiduales
(detergentes).
NMX-AA-44-1977
Determinación de
cromo hexavalente enagua.
NMX-AA-50
Determinación de
fenoles en agua.
NMX-AA-51
Determinación de
metales en el análisis de aguas.
MMX-AA-58
Determinación de
cianuros en el análisis de aguas.
NMX-AA-77
Determinación de
fluoruros en el análisisde aguas.
NMX-AA-78
Determinación de
zinc en el análisis de aguas.
NOM-AA-84-1982
Determinación de
sulfates en agua residuo y potable.
Determinación de
fosfatos en agua residuo
Se puede determinar la
estructura de una sustancia por medio del espectro de adsorción
en UV e infrarrojo.
•En el área
microbiológica y bioquímica:
En el control de cinética
enzimática (por ejemplo: como las siguientes enzimas: sacarosa, invertasa,
fructofurnosidasa, etc.), determina los cambios por efecto de concentración
de enzima, efecto por la concentraciónde sustrato, efecto causado por cambios de temperatura, efecto causado
por los cambios de pH.
a )Determinación de fósforo en DNA.
b)Determinación del
contenido de RNA (en el área de fermentaciones).
c)Determinación de
digestibilidad in uitro (en el área de fermentaciones). d)Determinación de
concentración de alcoholes superiores (en el área de fermentaciones).
•En el área de análisis de
alimentos:
a)Determinación de nitrógeno proteico.
Conclusión
Bueno,
de manera general debes colocar tu muestra en una celda y de acuerdo con las
especificaciones del equipo estableces las condiciones para el análisis,
realizas la corrida y obtienes el espectro que corresponde a tu muestra,
analizas los picos que te da y de acuerdo a la longitud de onda en donde
aparecen y su forma o longitud puedes determinar a qué grupo funcional
pertenecen los picos y sugerir un compuesto determinado, ahora dependiendo del
tipo de espectrofotómetro (si UV o IR) será la manera en como hagas los
análisis y la interpretación de los espectros
•Los espectrofotómetros son
útiles debido a la relación de la intensidad del color en una muestra y su
relación a la cantidad de solute dentro de la muestra. Por ejemplo, si usted
utiliza una solución del colorante rojo del alimento en agua, y mida la
cantidad de luz azul absorbida cuando pasa a través de la solución, una
fluctuación mensurable del voltaje puede ser inducido en una fotocélula en el
lado opuesto. Si ahora la solución del tinte rojo es diluida por la adición del
agua el color será menos intenso. Así, hay una relación entre el voltaje y la
cantidad de tinte en la muestra.
•El espectrofotómetro tiene la
capacidad de proyectar un haz de luz monocromática (de una longitud de onda
particular) a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida
por dicha muestra. Esto le permite al experimentadorrealizar dos funciones:
•Nos da información sobre la
naturaleza de la sustancia en la muestra. Esto podemos lograrlo midiendo la
absorbancia (Abs) a distintos largos de onda (l) y graficar estos valores en
función del largo de onda, formando un espectrograma. Como cada sustancia tiene
unas propiedades espectrales únicas, distintas sustancias producen distintos
espectrogramas. Esto se debe a que cada sustancia tiene un arreglo de átomos
tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga características
únicas.